На Диком Западе разворачивается драма о противостоянии человека и прогресса, воплощенного в строительстве железной дороги. Молодая вдова отказывается уступить землю, на которой планируется проложить новый путь для поездов, что вызывает неудовольствие местного дельца. Он поручает своему наемному убийце Фрэнку решить проблему силовым путем, ведь тот уже ранее был виновен в смерти мужа и приемных детей женщины.
На защиту вдовы встают два разных персонажа: Шайен, известный бандит, стремящийся к личной выгоде, и таинственный незнакомец с губной гармошкой, чье прошлое переплетено с историей Фрэнка. Их мотивы различны, но они объединяются в борьбе против общих врагов.
Серджо Леоне, режиссер фильма, отходит от своего обычного стиля, представленного в "Долларовой трилогии", делая акцент на более тяжелой и мрачной атмосфере. Это придает картине особую глубину и серьезность, подчеркивая трагичность уходящей эпохи Дикого Запада.
Фильм "Однажды на Диком Западе" представляет собой не только историю о противостоянии персонажей, но и метафору конца эры беспредела и начала новой эры цивилизации.